ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΑΚΗ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ IMUPRO

Παραγωγή των πλακών εξέτασης ImuPro

Παραλαμβάνουμε κενές πλάκες μικροτιτλοδότησης.

Υπάρχουν 270 τρόφιμα που επεξεργάζονται και οι πρωτεΐνες τους εκχυλίζονται. Είναι δύσκολο να εξασφαλιστεί, ότι τα εκχυλίσματα των τροφίμων αντανακλούν με ακρίβεια τη φύση των πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην αντίδραση αλλεργίας τύπου ΙΙΙ.

Αυτά τα 270 διαφορετικά πρωτεινικά διαλύματα (τρόφιμα) εφαρμόζονται πάνω στις άδειες πλάκες. Είναι σημαντικό το κάθε εκχύλισμα αλλεργιογόνου να τοποθετείται σε ξεχωριστό βοθρίο στην πλάκα. Δεν αναμυγνύουμε τα εκχυλίσματα αλλεργιογόνων. Αν υπήρχαν 2, 3 ή και 4 τρόφιμα στο διάλυμα που εφαρμόστηκε σε κάθε βοθρίο, τότε πώς θα γνωρίζαμε ποιό τρόφιμο προκάλεσε την αντίδραση; Αυτό θα περιορίσει τον βαθμό στον οποίο πρέπει να περιοριστεί η διατροφή σας.

Μετά από αυτή τη διαδικασία, οι πλάκες αποστέλλονται σε ένα εξειδικευμένο διαγνωστικό εργαστήριο. Τώρα είναι έτοιμες για το δείγμα σας.

Πιπετάρισμα του δείγματος του ασθενούς

Το δείγμα ορού που περιέχει τα αντισώματα IgG υποβάλλεται σε επεξεργασία στο εργαστήριο και εφαρμόζεται σε ολόκληρη την πλάκα, τοποθετώντας μια ποσότητα σε κάθε βοθρίο.

Κατά τη διάρκεια ενός χρόνου αντίδρασης 90 λεπτών τα αντισώματα IgG που υπάρχουν στον ορό αφήνονται να δεσμευτούν στα αντίστοιχα αντιγόνα τροφίμων (πρωτεΐνες) ακριβώς όπως 2 κομμάτια σε παζλ. Λόγω της λειτουργίας αυτών των αντισωμάτων θα δεσμεύονται μόνο στο αντίστοιχο αντιγόνο τους, πράγμα που μας επιτρέπει να “βλέπουμε” για ποιά τρόφιμα το σώμα σας παρήγαγε αυτά τα αντισώματα.

Στο παράδειγμά μας, δημιουργήθηκε μεγάλη ποσότητα αντισωμάτων έναντι πρωτεϊνών του πορτακαλιού, μικρή ποσότητα αντισωμάτων σε πρωτεΐνες σίτου και καθόλου αντισώματα έναντι πρωτεϊνών τομάτας στον ορό.

Τα αντισώματα στο σιτάρι δεσμεύονται στο βοθρίο που περιέχει πρωτεΐνες σίτου. Είναι σημαντικό ότι δεσμεύονται πολύ ισχυρά στις πρωτεΐνες σιταριού, έτσι ώστε αυτές οι πρωτεΐνες “να αιχμαλωτίζουν” τα συγκεκριμένα αντισώματα σε αυτό το συγκεκριμένο βοθρίο . Τα αντισώματα για το πορτοκάλι δεν μπορούν να δεσμευτούν επειδή δεν ταιριάζουν με τις πρωτεΐνες του σίτου και έτσι δεν θα δεσμευτούν σε αυτό το βοθρίο.

Πλύση της πλάκας μικροτιτλοδότησης

Στο επόμενο βήμα, οι πλάκες πλένονται, δηλαδή το υγρό (ορός) ξεπλένεται από τις πλάκες. Μόνο τα αντισώματα που έχουν προσδεθεί στις τροφικές πρωτείνες (που αιχμαλωτίζονται) παραμένουν στο βοθρίο.

Πιπετάρισμα ενός αντισώματος σε IgG

Στη συνέχεια, μια ουσία εφαρμόζεται στην πλάκα που μας επιτρέπει να “απεικονίσουμε” τη σύνδεση των αντισωμάτων: ένα αντίσωμα ειδικό για IgG.

Αυτό το δεύτερο αντίσωμα (που δεν πρέπει να συγχέεται με τα αντισώματα από το δείγμα σας) θα είναι ικανό να δεσμεύεται με όλα τα IgG αντισώματα από το δείγμα που δεν έχουν ξεπλυθεί από το προηγούμενο στάδιο πλύσης. Με άλλα λόγια, αυτό το αντίσωμα θα “ανιχνεύσει” όλα τα IgG που είναι προσδεδεμένα στα τρόφιμα που βρίσκονται στα βοθρία της πλάκας και τα οποία αιχμαλωτίζουν τα IgG από το δείγμα σας. Το ειδικό χαρακτηριστικό αυτού του αντισώματος είναι ότι φέρει ένα ένζυμο που δημιουργεί μια αντίδραση χρώματος. Κατά τη διάρκεια ενός χρόνου αντίδρασης 90 λεπτών, το νέο αντίσωμα προσδένεται στα άκρα των παρόντων IgG αντισωμάτων.

Πλύση της πλάκας μικροτιτλοδοτήσεως

Η πλάκα πλένεται και πάλι. Μόνο τα αντισώματα προς IgG που έχουν δεσμευθεί στα άκρα των παρούσων αντισωμάτων IgG (εκείνα που έχουν προσδεθεί στις πρωτεΐνες των τροφίμων) παραμένουν στο πηγάδι.

Πιπετάρισμα ενός διαλύματος χρώσης – αντίδραση χρώματος 

Τώρα, προστίθεται ένα διάλυμα χρώσης. Αυτό το διάλυμα είναι άχρωμο στην αρχή.

Όταν υπάρχουν αντισώματα, τα ένζυμα ενεργοποιούν μια αντίδραση χρώματος κατά τη διάρκεια ενός χρόνου αντίδρασης 60 λεπτών. Ανάλογα με την ποσότητα των αντισωμάτων σε ένα βοθρίο, η αντίδραση χρώματος θα είναι περισσότερο ή λιγότερο έντονη.

Η ένταση αυτής της χρωματικής αντίδρασης είναι ανάλογη της ποσότητας των IgG αντισωμάτων από το δείγμα σας και συνεπώς μπορεί να προσδιοριστεί η ποσότητα των IgG αντισωμάτων.

Αξιολόγηση και προετοιμασία των προσωπικών σας εγγράφων

Τέλος, αξιολογούνται τα αποτελέσματα. Με βάση τα αποτελέσματα του τίτλου των αντισωμάτων, τα τρόφιμα ταξινομούνται σε τρεις ομάδες: “χαμηλό”, “υψηλό” και “πολύ υψηλό” (εκτός από το ImuPro Screen). Το εργαστήριο στη συνέχεια προετοιμάζει και εκτυπώνει τα προσωπικά σας έγγραφα με τα αποτελέσματα.